苁蓉总苷对氢化可的松致肾阳虚小鼠学习记忆功能的影响

苁蓉总苷对氢化可的松致肾阳虚小鼠学习记忆功能的影响

皋聪,王传社,巫冠中,屠鹏飞

(1.北京大学中医药现代研究中心,北京100083;2.中国药科大学药理教研室,江苏南京210009;3.北京大学基础医学院,北京100872;4.北京大学药学院,北京100872)

摘要:目的:观察苁蓉总苷对氢化可的松所致肾阳虚模型小鼠学习记忆障碍的影响。方法:连续灌胃给予苁蓉总苷30d,于实验的第11～18天灌胃氢化可的松(正常对照组除外)复制肾阳虚模型,观察记录小鼠的一般状态及死亡情况,使用跳台法观察小鼠的学习记忆功能。结果:(1)苁蓉总苷各剂量组少动、竖毛、少食、少饮、颤抖等阳虚症状均有明显改善,动物死亡数明显减少。(2)苁蓉总苷各剂量组在给予氢化可的松后,各动物的跳台潜伏期明显延长,5min内的错误次数明显减少。结论:苁蓉总苷能明显改善氢化可的松致阳虚小鼠的一般状况及学习记忆功能障碍,并能明显降低小鼠的死亡率。

关键词:苁蓉总苷;肾阳虚模型;学习记忆

中图分类号:R338.64文献标识码:A文章编号:1006-3250(2005)05-0330-03

人口的老龄化已使寻找安全有效的防治老年痴呆症药物成为药物研究的热点。近年来,中医学使用以补肾益髓为主、兼补心脾的方法治疗老年痴呆症取得了较大的进展。中药肉苁蓉始载于《神农本草经》,具有补肾阳、益精血、润肠通便之功效,现广泛用于治疗老年性痴呆、阳痿、习惯性便秘等病症[1、2]。研究表明,其具有抗痴呆、抗氧化、抗缺氧、抗辐射、增强免疫功能等作用,主要成分为苯乙醇苷类[3～6]。苁蓉总苷从管花肉苁蓉Cistanche tubulosa(Schenk)Wight的干燥肉质茎中提取精制而成,含苯乙醇苷类90.7%,其中主要成分松果菊苷(echinacoside)44.3%。本文研究了苁蓉总苷对氢化可的松致肾阳虚小鼠学习记忆障碍的影响,为其开发成为促智和防治老年性痴呆症的新药提供依据。

1材料与方法

1.1动物健康昆明种小白鼠180只，体重18~22 g，雌雄各半，由中国药科大学动物中心提供，合格证号为苏动（质）97004。

1.2药物与试剂苁蓉总苷，由北京大学中医药现代研究中心化学室提供，批号为980601。脑复康片，宜兴制药厂生产，批号为980521。东莨菪碱注射液，上海禾丰制药有限公司生产，批号为980101。亚硝酸钠，如皋市华瑞试剂厂生产，批号为980220。上述药品和试剂用前以蒸馏水配成实验所需浓度。

1.3仪器

wx-Z型小鼠跳台仪，中国医学科学院药物研究所生产。

1.4方法

1.4.1东莨菪碱致小鼠记忆获得障碍模型的复制及测试[9]按体重将小鼠随机分为正常组、模型组、脑复康组以及苁蓉总苷高、中、低剂量组，每组15只。灌胃给药，正常组及模型组给予等体积的蒸馏水，每日1次，连续给药30 d。

于实验的第29天进行跳台训练，训练前1 h灌胃给药，于训练前15 min除正常对照组外各组腹腔注射东莨菪碱1 mg/kg。训练时将小鼠放入跳台仪的反应箱内适应环境3 min，然后立即通36 V交流电，小鼠受电击后，多数跳上跳台逃避电击，小鼠从跳台跳下受到电击后又跳回跳台，训练5 min。24 h后测试，将小鼠放于跳台上，记录小鼠第一次跳下跳台的时间（潜伏期）和5 min内的受到电击的次数（错误次数）。

1.4.2一般观察实验期间每日观察记录各组小鼠的一般状态及死亡情况,并于氢化可的松给药8d后(实验第19天)及氢化可的松停药10d后(实验的第30天)分别计算两个阶段各组小鼠的死亡率。

1.4.3跳台训练与测试[7]于实验的第19天,将小鼠放入跳台仪的反应箱内适应环境3min,然后立即通以36V的交流电,小鼠受电击后,多数跳上跳台逃避电击,小鼠从跳台跳下受到电击后又跳回跳台,训练5min。24h后测试,将小鼠放于跳台上,记录小鼠第一次跳下跳台的时间(作为潜伏期)和5min内的错误次数。于实验的第30天再次进行测试,记录各动物的潜伏期及5min内的错误次数。

1.5统计处理

潜伏期及5min内的错误次数结果均以(x±s)表示,用组间比较的t检验对数据进行统计处理。对于动物的死亡率则选用简化直接概率法进行统计处理。

2结果

2.1对氢化可的松所致阳虚模型小鼠的一般状态及死亡率改善作用模型组小鼠灌胃氢化可的松8d后,出现明显的少动、竖毛、少食、少饮、颤抖等阳虚症状,且有部分动物死亡,死亡率达42.1%。阳性组(金匮肾气丸1500mg kg)及苁蓉总苷各剂量组前述症状均有明显改善,动物死亡数减少,与模型组比较有显著性差异,说明苁蓉总苷及金匮肾气丸均能明显改善氢化可的松致阳虚小鼠的一般状况,并能降低小鼠的死亡率(表1)。

2.2对氢化可的松所致阳虚模型小鼠学习记忆障碍的改善作用

模型组在给予氢化可的松8d后,与正常组比较跳台测试的潜伏期明显缩短、错误次数明显增加,说明模型小鼠出现学习记忆功能障碍。阳性组及苁蓉总苷各剂量组在给予氢化可的松8d后,与模型组比较跳台测试的潜伏期明显延长,错误次数明显减少,说明金匮肾气丸及苁蓉总苷均可对抗氢化可的松引起的小鼠学习记忆功能障碍(表2)。

模型组小鼠在停用氢化可的松10d后,跳台测试的潜伏期及错误次数均有明显的恢复,与正常组小鼠无显著差异。阳性组及苁蓉总苷各剂量组在停用氢化可的松并继续给药10d后,与模型组比较跳台测试的潜伏期及错误次数仍有一定程度的改善,但无统计学差异。

3讨论

学习记忆是脑的高级功能，是构成智能的要素。在学习记忆的整个神经活动中，可分为获得、巩固及再现3个基本神经过程。学习记忆障碍是多种脑病包括老年期的脑血管硬化、脑供血不足、痴呆等所共有的症状。

中医认为，老年痴呆症等多属虚证，肾精亏损、心脾两虚而致髓海空虚，致痴致呆。肉苁蓉是传统的补益壮阳药，具有补肾填精及润肠作用，《本草经疏》称其为补精血、滋肾之要药，对肾虚所致倦怠、健忘、听力减退及遗尿等症状有较好的疗效。朱志明等对1990~1999有关杂志发表的治疗老年期痴呆的46个复方的药物组成进行了分析，发现肉苁蓉是常用药物之一[1]。日本佐藤周的动物实验证实肉苁蓉确有抗痴呆作用[3]。我们以往的实验表明，苁蓉总苷对正常小鼠的学习记忆功能有显著的促进作用，对乙醇所致的学习记忆再现障碍模型小鼠、肾阳虚模型小鼠、血管性痴呆模型大鼠等的学习记忆功能均有明显的保护作用。结合本实验的结果证实肉苁蓉确有促智作用，且对学习记忆整个神经活动中的获得、巩固及再现3个基本神经活动过程均有明显的保护作用，说明苁蓉总苷的促智作用是多层次、多环节的。因此，苁蓉总苷可能成为治疗老年性痴呆等以学习记忆障碍为主要症状疾病的有效药物。

参考文献：

[1]朱志明，周永生，欧阳剑虹.治疗老年期痴呆46个复方的药物分析[J].湖南中医杂志，2001，17（1)：60-61.

[2]于芳.肉苁蓉的临床应用研究进展[J].内蒙古医学杂志，2003，35（6)：535-536.

[3]sato T，Kozma s，Kobayashi K，et al.Pharmacological studies on Cis-tanchis Herba.1.Effects of the Constituents of Cistanchis Herba on sex and Learning Behavior in Chronic stressed Mice（1）[J].Yakugaku Zasshi，1985，105（12)：1131-1144.

[4]雷丽，宋志宏，屠鹏飞.肉苁蓉属植物的化学成分研究进展[J].中草药，2003，34（5)：473-476.

[5]梁明华，孙沛毅，曹毅.苁蓉总苷对兔失血性休克/再灌注损伤时脂质过氧化的影响[J].中国微循环，2000，4（4)：230-231.

[6]商小英，王晓雯，王雪飞，等.苁蓉总苷对60Co y射线损伤小鼠免疫功能的防护作用[J].中草药，2001，32（2)：139-142.

[7]邬利娅·伊明，王晓雯，早然木·尼亚孜.苁蓉总苷对小鼠脑缺氧的保护作用[J].新疆医科大学学报，2003，26（6)：561-562.

[8]Muteliefu Culinuer，Liu Mingju，Lu Jingfen.Effect of Cistanoside Com-pounds on 0xidative stress and Immunity[J].Journal of Chinese Phar-maceutical sciences，2001，10（3)：157-160.

[9]张均田.现代药理实验方法学[M].北京：北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，1998.1020-1021，1029-1031.