苁蓉美白防晒霜的制备及其质量评价

苁蓉美白防晒霜的制备及其质量评价

杨建华1，2 ，孟新源1 ，胡君萍2* ，刘盟1 ，帕哈尔丁·玉苏甫2 ，秦金辉2 ，热娜·卡斯木2

( 1． 新疆医科大学附属肿瘤医院，新疆 乌鲁木齐 830011; 2． 新疆医科大学药学院，新疆 乌鲁木齐 830011)

摘要: 目的   研制以肉苁蓉苯乙醇总苷为主要功效成分的美白防晒霜。方法   采用 O/ W 型乳剂配方，加入从肉苁蓉中提取精制的苯乙醇总苷，制成美白防晒霜。采用紫外分光光度法测定苯乙醇总苷的含量。采用紫外线照射复制皮肤损伤的病理   动物模型，比较小鼠皮肤外观的变化。结果该霜剂质地均匀细腻、易于涂抹、无刺激性、性质稳定，能有效减轻紫外线照射对皮肤的损伤。含量测定中，以松果菊苷为对照品，平均回收率为 98． 2% ，RSD = 1． 5% 。结论   该霜剂处方设计合理、制备工艺简单、性质稳定，对紫外线照射的皮肤损伤有一定保护作用，质量可控制。

关键词: 苯乙醇苷; 美白防晒霜; 制备; 质量评价

中图分类号:R94，R917文献标志码:A文章编号:1006 － 0103( 2011) 03 － 0271 － 03

在影响肤色的一系列因素中，最主要的就是黑色素。黑色素合成过多会引起雀斑、黄褐斑等。酪氨酸酶是皮肤黑素生物合成过程的主要限速酶，通过对酪氨酸酶活力的抑制研究，可以筛选抑制酪氨酸酶活性的有效成分［1］。皮肤是机体与外界接触的第一道生理屏障，在紫外线照射下，皮肤中产生活性氧和过氧化脂质，过氧化脂质使胶原蛋白交联，使皮肤失去弹性，产生皱纹。过氧化脂质在氧化酶作用下还可分解成丙二醛等物质，与蛋白质反应，形成褐素斑，产生色素沉着［2］。美白和防晒类化妆品的研究热点趋向于天然产物，已有不少中草药的提取物作为防晒美白的主要功效成分添加于化妆品中。我们在总结前期研究工作的基础上［3－4］，以肉苁蓉苯乙醇总苷作为主要功效成分，制备了美白防晒霜，观察其对紫外辐射损伤小鼠皮肤的保护作用，并建立了质量控制方法。

1实验部分

1.1仪器、试药与动物

UV－2550PC紫外分光光度计(日本岛津)。盐生肉苁蓉(新疆大漠生态有限责任公司)经鉴定为列当科肉苁蓉属植物盐生肉苁蓉Cistanche salsa干燥带鳞叶的肉质茎;松果菊苷对照品(自制，UV、IR、EI－MS、1 HNMR、13 CNMR数据符合文献值［5］，经HPLC面积归一化法测定纯度大于98%);尿囊素(天津化学试剂公司);美妮达冰爽控油防晒霜(广州市露姿化妆品有限公司);熏衣草精油(广州市名仁堂化妆品有限公司);水为纯水;其他试剂为分析纯。昆明种♂小鼠［新疆医科大学实验动物中心，许可证号:SCXK新(2003)0001］，SPF级，体重18～22 g。

1.2方法与结果

1.2.1苯乙醇总苷的制备取干净的盐生肉苁蓉药材，粉碎成小块，分别以10、6、3倍量的70%乙醇加热回流提取3次，合并提取液，减压浓缩至稠膏状(50℃密度约为1．1 g·mL－1)，加乙醇至含醇量60%，静置过夜，过滤，浓缩滤液，加水溶解。水液通过SP825大孔吸附树脂柱层析，分别以水、乙醇溶液洗脱，收集30%～50%乙醇洗脱流份，减压浓缩至稠膏，冷冻干燥，即得苯乙醇总苷的精制粉末。

1.2.2霜剂处方与制备处方为:苯乙醇总苷适量、尿囊素0．3 g、橄榄油3．0 g、蜂蜡2．0 g、维生素E 0.1 g、十二烷基硫酸钠2．0 g、阿拉伯树胶4．0 g、硬脂酸4．0 g、单硬脂酸甘油酯6．0 g、液体石蜡7．0 g、甘油8．0 g、羟苯乙酯0．1 g、熏衣草精油0．1 g、氮酮5．0 mL、丙二醇6．0 mL，纯水加至100．0 g。

将羟苯乙酯、尿囊素加入到水相中，超声10 min，加入苯乙醇总苷、十二烷基硫酸钠、阿拉伯树胶并在水浴锅上加热至80℃溶解，再将油相(单硬脂酸甘油酯、液状石蜡、硬脂酸、蜂蜡、橄榄油)于水浴锅上加热至80℃，恒温15 min后，快速搅拌条件下，将油相缓缓加入水相中，以300 r·min－1搅拌至乳化完全，待温度降至50～60℃时，缓缓加入已初步用甘油和丙二醇溶解过的Vit E混悬液，随后再加入氮酮和薰衣草精油，继续搅拌30 min至室温，即得。

1.2.3紫外线辐照皮肤损伤试验取小鼠48只，适应性饲养2 d，分别用剪刀将小鼠背部毛剪去，在剪毛区用棉球蘸10%Na2 S水溶液脱去背部残留毛，裸露皮肤，面积约为2 cm×2 cm，每3天脱一次毛，共6次。脱毛后的皮肤用清水洗净，24 h后随机分为6组，即空白对照组(蒸馏水处理)、阳性对照组(美妮达冰爽控油防晒霜处理)、基质对照组(未加苯乙醇总苷的霜剂处理)及苯乙醇苷高、中、低剂量组(分别含2、1、0．5 g苯乙醇总苷的霜剂处理)。将小鼠置紫外灯下，距离灯管30 cm进行照射，第11、2、3周分别1、2、3 h·d－1。每次照射前脱毛区涂抹约0．5 mL相应药物。

空白对照组和基质对照组的小鼠背部的皮肤有中度红斑形成，且逐渐增厚、脱屑、颜色加深，出现皱缩、粗糙变硬现象、失去光泽、背毛生长缓慢。苯乙醇总苷低剂量组小鼠背部的皮肤也有轻度红斑形成，出现皱缩、粗糙变硬现象、背毛生长较慢。阳性对照组和苯乙醇总苷中、高剂量组小鼠的皮肤外观无明显变化，小鼠背毛生长正常，与空白对照组和基质对照组比较有明显差异。

1.2.4性状与细腻度样品为浅棕色霜剂，具薰衣草香味。将样品置显微镜下观察，并涂布于皮肤，制剂分布均匀、细腻柔滑、无颗粒、稠度适宜。

1.2.5酸碱度测定称取5 g样品，加100 mL纯化水，加热微沸，搅匀，冷却，过滤，测得pH6．5～6.9，符合外用乳剂pH小于8．3的要求。

1．2．6卫生学检查与皮肤刺激性实验按照《中国药典》2010年版二部附录XI J微生物限量检查法项下的方法检查，霉菌、酵母菌、金黄色葡萄球菌等符合标准。在健康人手背处每日涂抹0．5 g样品，面积约3 cm2，持续1个月，涂药处无皮肤发红、发疹、水泡等不良反应。

1．2．7制剂的稳定性试验将所制霜剂取适量装入试管中，用封口膜封口，经50℃水浴5 h后，再放入2～8℃冰箱中冷藏，24 h后取出，恢复至室温，无油、水分层现象。取3批样品各5 mL装入离心试管中，经2．5×103 r·min－1离心30 min，霜剂未出现油、水分层现象。将3批样品各30 g装入包装盒，加盖，室温下放置1、2、3个月，抽样检查，未见明显变化。

1．2．8溶液的制备精密称取松果菊苷对照品适量，加甲醇溶解，制备400μg·mL－1的对照品贮备液。取1．5 mg苯乙醇总苷原料药，用甲醇溶解，超声提取15 min(45 kHz)，置25 mL量瓶中，取续滤液10 mL，置25 mL量瓶中，用甲醇定容，制得苯乙醇总苷原料药供试品溶液，备用。精密称取15 mg含苯乙醇总苷的防晒霜，置25 mL量瓶中，加甲醇适量，超声提取15 min(45 kHz)，使之破乳分散，用甲醇定容，取干燥滤纸迅速过滤，精密量取续滤液10 mL，置25 mL量瓶中，用甲醇定容，制得苯乙醇总苷美白防晒霜供试品溶液，备用。精密称取15．0 mg未加苯乙醇总苷的空白霜剂，置25 mL量瓶中，加甲醇适量，超声提取15 min(45 kHz)，使之破乳分散，用甲醇定容，取干燥滤纸迅速过滤，精密量取续滤液10 mL，置25 mL量瓶中，用甲醇定容，制得空白霜剂供试液，备用。

1.2．9测定方法的确定扫描松果菊苷对照品溶液、苯乙醇总苷供试品溶液、美白防晒霜供试品溶液、空白霜剂供试液的紫外光谱图，前三者的紫外图谱基本一致，空白不干扰，最大吸收波长均为333 nm，因此，选择松果菊苷为对照品，采用紫外法测定苯乙醇总苷的含量(图1)。

1．2．10线性考察精密吸取松果菊苷对照品贮备液0．2、0．6、1．0、1．4、1．8、2．0 mL，置25 mL量瓶中，以甲醇稀释定容。在333 nm处以甲醇液作空白，测定吸光度。以浓度对吸光度回归，标准曲线方程为:Y=0．0319X+1．7600×10－3(r=0．9999)。

1．2．11回收率实验精密称取美白防晒霜供试品适量，分别加入0．05、0．10、0．15 mL松果菊苷对照品溶液(100μg·mL－1)，按“1.2.8”项下方法操作，于333 nm测定吸光度，其平均回收率为98．2%，RSD=1．5%。

1．2．12精密度实验取20μg·mL－1的松果菊苷对照品溶液，于333 nm测定吸光度，平行测定5次，其RSD=0．02%，表明仪器精密度良好。

1．2．13稳定性实验取美白防晒霜供试品溶液，分别于0、3、6、9、12 h时在333 nm测定吸光度，其RSD=0．07%，表明样品稳定性良好。

1．2．14样品的测定取含0、0．5、1．0、2．0、3．0 g苯乙醇总苷防晒霜，按“1．2．8”项下方法操作，制备供试品溶液，于333 nm测定吸光度。结果显示:含不同剂量的苯乙醇总苷霜剂的实际加药量与理论计算值基本符合，波动范围为±4%。

2讨论

肉苁蓉是传统的名贵补益类中药，主要含有苯乙醇苷、环烯醚萜苷、木脂素及甾醇等化学成分，其中，苯乙醇苷是其主要活性成分。我们曾对肉苁蓉进行了较为系统的研究［5－10］。古代中医药学文献记载肉苁蓉具悦色养颜的功效，但现代医药学及化工美容领域对肉苁蓉美容作用的研究鲜有报道。以此为线索，采用酪氨酸多巴速率氧化法对肉苁蓉中的苯乙醇总苷进行了酪氨酸酶活性的调控研究，结果显示:苯乙醇总苷能够显著下调酪氨酸酶的活性［3－4］，为肉苁蓉在天然美白化妆品领域的开发应用提供了理论依据。

苯乙醇苷分子结构中具有多个共轭体系，经紫外扫描，在280～380 nm有较强吸收，最大吸收波长为333 nm。表明肉苁蓉苯乙醇苷类化合物对紫外线具有良好的吸收作用，可较好地防止和缓解紫外辐射对皮肤的伤害。所制霜剂外观均匀、质地细腻、涂展性好、性质稳定、质量可控。采用紫外分光度法对其有效成分的含量进行测定时，空白基质的紫外吸收很小，在333 nm处无紫外吸收，因此不影响霜剂中苯乙醇苷的含量测定。肉苁蓉苯乙醇总苷为棕色粉末，加入量过多会影响到美白防晒霜的外观。加入量控制在3%以下，产品外观色泽较好。乳化过程中应控制搅拌机的转速，过快会产生颗粒样气泡。乳化剂的用量不宜过大，以避免乳化过程中有油滴样物质漂浮而影响成品霜剂的性状。

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收稿日期:2010－10－15