肉苁蓉醇提物对去卵巢骨质疏松大鼠的治疗作用及其机制

肉苁蓉醇提物对去卵巢骨质疏松大鼠的治疗作用及其机制

朱刚１，孙海斌２，徐刚３

（１．郑州大学第五附属医院骨外科，河南郑州４５００５２；２．郑州大学第五附属医院病理科，河南郑州４５００５２；

３．河北医科大学第二医院烧伤整形科，河北石家庄０５３６００）

［摘要］目的：探讨肉苁蓉醇提物（ＣＤＥ）对骨质疏松大鼠的治疗作用，阐明其作用机制。方法：７２只雌性ＳＤ大鼠随机分为对照组，模型组，雌二醇组（０．３ｍｇ·ｋｇ－１），低、中和高剂量（０．５、１．０和２．０ｇ·ｋｇ－１）ＣＤＥ组；每组１２只。对照组大鼠摘除少量卵巢周围脂肪，其余各组大鼠手术摘除双侧卵巢，制备骨质疏松模型。手术后第５天，雌二醇组大鼠皮下注射雌二醇，不同剂量ＣＤＥ组大鼠分别开始灌胃相应剂量的ＣＤＥ，对照组和模型组大鼠给予等量蒸馏水。给药２０周后，质体比法检测大鼠右侧股骨密度，骨力度仪检测大鼠左侧股骨生物力学指标，ＥＬＩＳＡ法检测大鼠血清中碱性磷酸酶（ＡＬＰ）及骨钙素水平，全自动生化仪检测大鼠血清中钙离子和磷离子水平，ＨＥ染色观察大鼠子宫组织形态。结果：与模型组比较，雌二醇组及低、中和高剂量ＣＤＥ组大鼠右侧股骨密度明显升高（P＜０．０５或P＜０．０１），各剂量ＣＤＥ组间比较差异无统计学意义（P＞０．０５）；与模型组和低剂量ＣＤＥ组比较，中和高剂量ＣＤＥ组大鼠左侧股骨的最大弯曲力、最大应变和骨刚性明显升高（P＜０．０５），血清中ＡＬＰ水平降低（P＜０．０５）。与模型组及低、中剂量ＣＤＥ组比较，高剂量ＣＤＥ组大鼠血清中骨钙素水平明显降低（P＜０．０５）。与模型组比较，低、中和高剂量ＣＤＥ组大鼠血清钙离子水平明显升高（P＜０．０５），各剂量ＣＤＥ组间比较差异无统计学意义（P＞０．０５）。与模型组比较，低、中和高剂量ＣＤＥ组大鼠子宫组织形态表现均有不同程度改善。结论：ＣＤＥ可以通过升高大鼠血清ＡＬＰ、骨钙素及钙离子水平起到治疗骨质疏松的作用。

［关键词］肉苁蓉；醇提物；碱性磷酸酶；骨钙素；钙离子

［中图分类号］Ｒ２８５．５；Ｒ６８１［文献标志码］Ａ

骨质疏松是以骨密度降低及其显微结构发生实质性变化为主要特征的一类型疾病。骨质疏松的发病与年龄呈明显的正相关关系，尤其在４０岁以上人群其相关性更加明显［１２］。目前，我国６０岁及以上人口总数已达到总人口数的１３．２６％［３］。对于骨质疏松的治疗现以使用骨吸收抑制剂、骨形成促进剂等治疗为主，虽然药物疗效确切，但不良反应也十分明显，寻找毒副作用小的治疗药物显得尤为重要［４］。肉苁蓉是名贵中药之一，又有沙漠人参的美誉。中国药典记载，肉苁蓉具有补肝肾、益精气的功效［５］。现代药理研究［６］证实：肉苁蓉具有一定的雌激素样作用。而雌激素是治疗女性骨质疏松的临床常用药物之一。国内外暂无使用肉苁蓉醇提物（ｃｉｓｔａｎｃｈｅｄｅｓｅｒｔｉｃｏｌａｅｔｈａｎｏｌｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，ＣＤＥ）进行骨质疏松治疗的研究，因此本文作者旨在探讨ＣＤＥ对去卵巢所致的骨质疏松大鼠的治疗作用及其机制，为肉苁蓉的临床应用奠定基础。

１材料与方法

１．１实验动物、药物、主要试剂和仪器雌性ＳＤ大鼠７２只，ＳＰＦ级，体质量１４０～１８０ｇ，购于河南省实验动物中心，动物合格证号：ＳＣＸＫ（豫）２００５０００１。饲养于ＳＰＦ级实验动物房，室温（２３±２）℃，光照与黑暗时间各１２ｈ。戊酸雌二醇，购于德国拜耳公司，使用前用生理盐水配置成０．３ｇ·Ｌ－１注射液。肉苁蓉，购于北京同仁堂，打粉过１０ｍｍ筛，加入７５％乙醇溶液利用索氏提取器，回流提取４ｈ，共提取２次，合并２次提取液，置于负压的旋转蒸发仪中，６０℃浓缩至生药量为１ｇ·ｍＬ－１。骨钙素试剂盒（南京建成生物工程研究所），碱性磷酸酶（ＡＬＰ）ＥＬＩＳＡ试剂盒（美国Ｒ＆Ｄ公司），多聚甲醛（天津大茂化学试剂有限公司），其余化学试剂均为国产分析纯。恒温水浴槽（上海精宏实验设备有限公司），骨密度仪（美国ＨＯＬＯＧＩＣ公司），全自动生化仪（河北厚德汉方医疗器械公司），常温低速离心机（湖南湘仪仪器有限公司），酶标仪（美国Ｂｉｏｒａｄ公司），骨密度仪和生物力学试验仪（英国ＬＬＯＹＤ公司），游标卡尺（广州晨光科技有限公司）。

１．２实验动物分组、造模和给药７２只雌性ＳＤ大鼠随机分为对照组，模型组，雌二醇组（０．３ｍｇ·ｋｇ－１），低、中和高剂量（０．５、１．０和２．０ｇ·ｋｇ－１）ＣＤＥ组；每组１２只。除对照组外，其余各组大鼠进行双侧卵巢摘除手术。３％戊巴比妥钠麻醉大鼠，使用剃毛器剔除背部中下部分毛发，酒精及碘酒双重消毒后，背部正中间开口，分别往两边扯动找到卵巢位置。使用手术线结扎子宫顶端后，剪除双侧卵巢，最后伤口缝合，并撒上青霉素。对照组大鼠于卵巢周围剪去少量脂肪。手术完成后，大鼠置于暖炉旁恢复，并连续３ｄ肌肉注射青霉素预防感染（每天２０万单位）。手术后第５天，待动物状态恢复正常后，开始灌胃给药。

１．３大鼠右侧股骨密度测定给药２０周后，麻醉大鼠，腹主动脉取血完成后，分离大鼠右侧股骨。钝性分离股骨后，使用纱布擦去股骨附近肌肉及组织，采用骨密度仪对离体大鼠右侧股骨进行密度分析。

本研究结果显示：ＣＤＥ给药后可以有效地改善去卵巢所导致大鼠股骨生物力学功能下降。而现代药理学研究证实了肉苁蓉具有雌激素样作用，这也是肉苁蓉能够起到治疗骨质疏松的原因之一。

［参考文献］

［１］严孙杰，冯霖，沈喜妹，等．健康成人体成分差异对不同年龄段人群骨密度的影响［Ｊ］．福建医科大学学报，２００９，４３（４）：３０１３０５．

［２］张萌萌．中国老年学学会骨质疏松委员会骨代谢生化指标临床应用专家共识［Ｊ］．中国骨质疏松杂志，２０１４，２０（１１）：１２６３１２７２．

［３］胡鞍钢，刘生龙，马振国．人口老龄化、人口增长与经济增长———来自中国省际面板数据的实证证据［Ｊ］．人口研究.２０１２，３６（３）：１４２６．

［４］胡一梅．老年性骨质疏松症病理研究及治疗进展［Ｄ］．成都：成都中医药大学，２００６．

［５］赖青海，王琳琳，丁辉，等．肉苁蓉治疗骨质疏松症研究进展［Ｊ］．辽宁中医药大学学报，２０１６，１８（３）：１０２１０４．

［６］魏珍珍．肉苁蓉苯乙醇苷对大、小鼠围绝经期模型的影响［Ｄ］．郑州：河南中医学院，２０１４．

［７］ＧｅｉｓｌｅｒＪ，ＬｏｎｎｉｎｇＰＥ，ＫｒａｇＬＥ，ｅｔａｌ．Ｅｓｔｒｏｇｅｎｓａｎｄｂｏｎｅｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｉｎｐｏｓｔｍｅｎｏｐａｕｓａｌｗｏｍｅｎｗｉｔｈｅａｒｌｙｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒａｔｌｏｗｒｉｓｋｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈｅｘｅｍｅｓｔａｎｅ：ａｒａｎｄｏｍｉｚｅｄｐｌａｃｅｂｏｃｏｎｔｒｏｌｅｄｓｔｕｄｙ［Ｊ］．ＪＣｌｉｎＯｎｃｏｌ，２００４，２２（１４）：５３１．

［８］ＦｌｏｒｅｓＲ，ＤｈｒｍａｎｎＳ，ＳｃｈａａｌＣ，ｅｔａｌ．Ｔｈｅｓｅｌｅｃｔｉｖｅｅｓｔｒｏｇｅｎｒｅｃｅｐｔｏｒｍｏｄｕｌａｔｏｒｒａｌｏｘｉｆｅｎｅｉｎｈｉｂｉｔｓｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｅｘｔｒａｃｅｌｕｌａｒｔｒａｐｆｏｒｍａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＦｒｏｎｔＩｍｍｕｎｏｌ，２０１６，７：５６６．

［９］李素萍．骨质疏松动物模型的研究现状［Ｊ］．中国组织工程研究与临床康复，２０１１，１５（２０）：３７６７３７７０．

［１０］杨峻山．沙漠人参—肉苁蓉［Ｊ］．中国药学杂志，２０１１，４６（１２）：８８１．

［１１］黄继锋，宋敏，李泽佳，等．补肾固本方对去卵巢大鼠骨质疏松症骨密度、骨矿盐含量及ＣＴ含量的影响［Ｊ］．中国实验方剂学杂志，２０１５，２１（４）：１４９１５２．